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益母草

別名茺蔚、坤草，是一種草本植物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新，活血調(diào)經(jīng) ，利尿消腫，是歷代醫(yī)家用來(lái)治療婦科疾病之要藥。

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  據(jù)現(xiàn)代臨床及動(dòng)物實(shí)施證明，益母草浸膏及煎劑對(duì)子宮有強(qiáng)而持久的興奮作用，不但能增強(qiáng)其收力，同時(shí)能提高其緊張度和收縮率。益母草全草含益母草堿(Leonurine)約0.05％(花初期含微量，花中期逐漸增高)，水蘇堿(stachydrine)，蘆丁(rutin)，延胡索酸(反丁烯二酸fumaric acid)，益母草堿甲和益母草堿乙。細(xì)葉益母草全草含生物堿0.05％。

從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，鹽酸益母草堿和鹽酸水蘇堿由于含有較多的極性基團(tuán)(-OH、-NH2、-COOH)和孤對(duì)電子，水溶性特別強(qiáng)，因此普通的C18反相色譜柱已不能滿足此類化合物的分析要求，重要的原因即親水性成分在C18柱上沒(méi)有保留。

                                                                      鹽酸益母草堿 結(jié)構(gòu)式                                   鹽酸水蘇堿 結(jié)構(gòu)式

推薦：艾杰爾Venusil stachydrine色譜柱，首支進(jìn)入《中國(guó)藥典》2010 年版的國(guó)產(chǎn)親水作用色譜柱

艾杰爾Venusil stachydrine色譜柱

鹽酸水蘇堿專項(xiàng)色譜柱專為分析益母草中鹽酸水蘇堿而設(shè)計(jì)。該產(chǎn)品是以硅膠為基質(zhì)，鍵合相由于采用了中性的酰胺基團(tuán)，在親水作用色譜模式下對(duì)強(qiáng)極性、水溶性堿性有機(jī)化合物有很好的選擇性。

??HILIC是一種親水作用色譜模式，其洗脫是以化合物親水性/極性增加的次序排列，提高流動(dòng)相中有機(jī)相的比例會(huì)增加溶質(zhì)的保留，典型的流動(dòng)相是乙腈（40%--97%）/水（或揮發(fā)性緩沖鹽），同時(shí)它可以使用更高揮發(fā)性的流動(dòng)相或緩沖鹽，方便了與質(zhì)譜檢測(cè)器和蒸發(fā)光檢測(cè)器的聯(lián)用。

益母草中鹽酸水蘇堿分析及圖譜

參照2015版中國(guó)藥典一部益母草含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件：
以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑

以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（80:20）為流動(dòng)相，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。要求理論塔板數(shù)以鹽酸水蘇堿計(jì)算應(yīng)不低于6000。

色譜柱：Venusil stachdrine
規(guī)格：5μm，4.6*250mm 
訂貨號(hào)：VH952505-LH
流動(dòng)相：乙腈︰0.2%   冰醋酸溶液=80︰20（v/v）
流速：0.5 mL/min
柱溫：20°C
檢測(cè)器：ELSD（蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）
進(jìn)樣量：10μL 

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注：如需訂購(gòu)，請(qǐng)?jiān)诨て脚_(tái)網(wǎng)上搜索廈門(mén)廣晟達(dá)儀器設(shè)備有限公司，進(jìn)行選型訂購(gòu)。

結(jié)論：

本實(shí)驗(yàn)采用鍵合有丙基酰胺固定相的水蘇堿專柱Venusil stachdrine，根據(jù)2015版中國(guó)藥典一部益母草含量測(cè)定項(xiàng)下的色譜條件，色譜柱保留效果良好，理論塔板數(shù)以鹽酸水蘇堿計(jì)算為15203>6000，能夠滿足檢測(cè)要求。

色譜柱：Venusil stachdrine使用和?維護(hù)

防護(hù)

在連接和使用色譜柱時(shí)要注意安全，佩戴手套、口罩和防護(hù)鏡，任何原因（管路連接不緊、管路老化、PEEK頭老化）導(dǎo)致的溶劑和樣品泄露直接接觸到操作人員，都會(huì)對(duì)操作人員的健康產(chǎn)生影響。

使用方向

色譜柱在使用過(guò)程中要保持流動(dòng)相方向和色譜柱標(biāo)示的箭頭方向一致，如無(wú)特殊情況，不建議反向使用（如為清洗色譜柱前柱頭的污染物時(shí)，可考慮低流速反向沖洗）

活化

新的鹽酸水蘇堿專柱出廠時(shí)柱體中的液相為乙腈，在儲(chǔ)存和運(yùn)輸過(guò)程中柱體可能會(huì)出現(xiàn)短暫干涸，故新柱*使用前需使用大于20倍柱體積的乙腈以0.5mL/min的流速進(jìn)行活化后再選擇實(shí)驗(yàn)所需的操作條件進(jìn)行平衡，如果實(shí)驗(yàn)所需的流動(dòng)相中含緩沖液，需使用與流動(dòng)相等比例的有機(jī)相和水進(jìn)行過(guò)渡，避免出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。

樣品前處理

為了避免樣品或流動(dòng)相中的微粒雜質(zhì)對(duì)色譜柱前篩板造成堵塞，實(shí)驗(yàn)所用的所有試劑和樣品在使用前都應(yīng)使用0.45μm或0.22μm的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾。對(duì)于基質(zhì)較復(fù)雜的樣品，推薦使用SPE固相萃取系統(tǒng)進(jìn)行前處理。

流動(dòng)相和樣品pH

為了使色譜柱獲得更佳的壽命和效果，請(qǐng)遵循廠家建議的pH范圍內(nèi)使用，鹽酸水蘇堿專柱pH適用范圍為2.0-6.0，pH過(guò)高會(huì)使硅膠溶解，pH過(guò)低會(huì)導(dǎo)致部分或全部的鍵合相脫落，出現(xiàn)柱性能下降，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不重現(xiàn)。

流動(dòng)相和樣品溶劑

應(yīng)避免流動(dòng)相在高有機(jī)相體系下使用與有機(jī)相不互溶的磷酸鹽或其他緩沖鹽，避免由于鹽析損壞色譜柱。為不干擾HILIC分離機(jī)制，不要使用三氟二酸和其他離子對(duì)試劑。如果可能，請(qǐng)盡量選擇流動(dòng)相溶解樣品，不要使用水或DMSO溶解樣品，避免出現(xiàn)溶劑效應(yīng)導(dǎo)致的峰型變差。

柱溫和壓力

最大操作溫度應(yīng)低于60℃，長(zhǎng)期在高溫下使用（＞60℃）會(huì)損壞色譜柱，這種情況在Ph>6.0時(shí)表現(xiàn)明顯。色譜柱可承受400Bar的壓力，但長(zhǎng)期處于高壓狀態(tài)會(huì)影響色譜柱的性能和使用壽命，正常操作使用時(shí)建議柱壓應(yīng)低于200Bar。

保護(hù)柱

在進(jìn)行基質(zhì)較復(fù)雜的樣品分析時(shí)，為使色譜柱獲得更好的壽命，建議在色譜柱前使用保護(hù)柱，阻擋系統(tǒng)中的微粒和延緩樣品對(duì)固定相的化學(xué)污染。

沖洗程序

色譜柱使用完畢后需依次使用50%乙腈、5%乙腈、100%乙腈以0.5mL/min沖洗至少20倍柱體積，如果柱前有連接保護(hù)柱，需與色譜柱斷開(kāi)分別進(jìn)行沖洗。

儲(chǔ)存

儲(chǔ)存色譜柱時(shí)，不要有水或緩沖液留在色譜柱中，可使用乙腈作為色譜柱的封存溶劑。長(zhǎng)期不用的色譜柱為了防止柱床干涸，建議定期對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗，沖洗完畢用堵頭塞緊色譜柱的兩