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Luna C18及Luna系列色譜柱的保養(yǎng)和使用技巧

更新時(shí)間:2021-05-11      點(diǎn)擊次數(shù):8220

一般信息

Phenomenex制造每個(gè)Luna色譜柱都是單獨(dú)制備和測試的。每根色譜柱均有一份質(zhì)量保證(CQA)證書,其指示檢測條件,運(yùn)行參數(shù),和色譜柱的信息。該色譜柱的詳細(xì)信息,包括規(guī)格和性能測試結(jié)果應(yīng)被輸入到信息管理系統(tǒng),方便跟蹤和參考。您還可以從以下網(wǎng)站獲取質(zhì)量文檔的電子副本。

檢查

收到色譜柱后,請(qǐng)確認(rèn)您收到的色譜柱是您訂購的色譜柱(即尺寸,粒徑,介質(zhì))。此外,請(qǐng)檢查色譜柱是否在運(yùn)輸過程中可能造成任何物理損壞。立即測試色譜柱以驗(yàn)證性能并將測試結(jié)果記錄在色譜柱信息管理系統(tǒng)中。

???色譜柱特

*在梯度條件下的pH穩(wěn)定性。在等度條件下,pH穩(wěn)定性為1.5-10。

*在梯度條件下,pH范圍為1.5-9。在等度條件下,pH范圍為1.5-10。

運(yùn)輸溶劑

除非在色譜柱標(biāo)簽上另有說明,否則Luna CN和NH 2色譜柱以乙腈/己烷(1:99 v / v)裝運(yùn)。Luna SCX色譜柱以150 mM 磷酸銨(pH 6.0)裝運(yùn),Luna HILIC色譜柱以HILIC條件(乙腈/ 100 mM甲酸銨pH 3.2(90:10 v / v))裝運(yùn)。所有其他Luna固定相均已裝運(yùn)乙腈/ H2O(65:35 v / v)。

典型流量,背壓,溫度:

以下是Luna HPLC和UHPLC色譜柱通用尺寸的一些典型值。這些數(shù)字不是絕對(duì)值,并且會(huì) 根據(jù)液相色譜系統(tǒng),運(yùn)行參數(shù)和樣品分析物/基質(zhì)而有所不同。下面的值是使用乙腈和的溶劑系統(tǒng)創(chuàng)建的。

典型流速(與粒徑無關(guān)):

                  1、內(nèi)徑4.6 mm時(shí)為1.0 mL / min

                  2、內(nèi)徑2.1 mm時(shí)為0.2-0.6 mL / min

最大背壓:

                 ? 3、1.6um>15,000psi(1034bar)可能損害柱壽命。

                 ? 4 、3μm或5μm > 5000 psi(345 bar)可能會(huì)損害色譜柱的壽命。

最高溫度:

                 ? 5、Luna色譜柱推薦最高溫度是60℃,但溫度范圍依賴于你的運(yùn)行參數(shù)。

                 ? 6、在最高溫度極限下連續(xù)使用Luna色譜柱可能會(huì)損害色譜柱的使用壽命。

                 ? ?7、基于常見的流動(dòng)相擴(kuò)大了Luna Omega相的溫度使用范圍:

                               a.甲酸:90°C(C18,Polar C18),80°C(PS C18)

                               b.三氟二酸:80°C(C18,Polar C18), 60°C(PS C18)

                               c. pH 7.5磷酸鹽緩沖液:50°C(C18), 30°C(Polar C18),50°C(PS C18)

                               d. pH 8.5的碳酸氫銨緩沖液:50°C(C18),30°C (Polar C18),50°C (PS C18)

流動(dòng)相兼容性

當(dāng)使用任何HPLC / UHPLC柱,一定要使用僅HPLC級(jí)溶劑和材料,同時(shí)也避免不混溶的溶

劑/緩沖溶液。

此外,強(qiáng)烈建議使用溶劑過濾來從您選擇的流動(dòng)相中除去痕量雜質(zhì)。以下Luna系列色譜柱在

100%水性條件下穩(wěn)定:Polar C18,PS C18,PFP( 2)和SCX。所有Luna色譜柱在100%

有機(jī)條件下均穩(wěn)定,但請(qǐng)確保流動(dòng)相的pH值不超過各個(gè)固定相的限值。有關(guān)各個(gè)Luna固定

相pH限值的信息,請(qǐng)參見色譜柱特征部分中的圖表。

 

色譜柱安裝

LC系統(tǒng)的初始設(shè)置對(duì)于確保色譜柱性能非常重要:

確保您的液相色譜系統(tǒng)已準(zhǔn)備就緒:

1.密封管路,進(jìn)樣口清潔

2.流動(dòng)相管路無干線或氣泡

3.穩(wěn)定的基線

4.一致的壓力

用流動(dòng)相沖洗液相色譜系統(tǒng)泵和管線(HPLC級(jí),可與色譜柱附帶的溶劑混溶)。

流動(dòng)相起始條件檢查清單:

1.在使用前,請(qǐng)確保HPLC級(jí)流動(dòng)相充分混合,過濾和脫氣。

2.確保色譜柱運(yùn)輸溶劑,液相色譜系統(tǒng)中剩余的溶劑和流動(dòng)相溶劑可混溶。

將流速設(shè)置為0.1 mL / min(對(duì)于2.1-4.6 mm內(nèi)徑),并安裝色譜柱,確保箭頭指向流動(dòng)方向。然后將流速增加至0.2 mL / min(2.1mm 內(nèi)徑)或1.0 mL / min(4.6 mm 內(nèi)徑)5-10分鐘。將溶劑收集在一個(gè)小燒杯中。

停止流動(dòng) ,并擦拭出口端的柱 ,以除去任何顆粒連接到前檢測器。

將配件/管安裝到出口端,并在監(jiān)測背壓的同時(shí)以低流量(?0.2 mL / min)運(yùn)行至少10個(gè)色譜柱體積。

1.穩(wěn)定的壓力應(yīng)表示流量恒定,而壓力波動(dòng)則表示系統(tǒng)中有空氣。

2.在壓力寬波動(dòng)可能沖擊和損壞列,以便監(jiān)視它的重要壓力。

監(jiān)測壓力以及檢測器發(fā)出的信號(hào),當(dāng)兩者穩(wěn)定后,就可以使用色譜柱了。

測試色譜柱性能

測試色譜柱性能時(shí),請(qǐng)使用制造商認(rèn)可的測試混合物。

色譜柱清洗

色譜柱清洗

反相:

   用接近系統(tǒng)上最后一個(gè)溶劑系統(tǒng)的梯度進(jìn)行清潔:

典型的裝載能力

例如,如果最后一次進(jìn)樣以緩沖液/乙腈(75:25)結(jié)尾,則更合適的方法是從95:5 H 2 O /  乙腈開始,然后根據(jù)需要逐步移動(dòng)以增加

有機(jī)物含量(即75:25 H 2 O /乙腈50:50 H 2 O /乙腈5:95 H 2 O /乙腈)。

   對(duì)于疏水性或油性材料,請(qǐng)嘗試用二氯甲烷沖洗 。

或IPA。使用IPA時(shí),請(qǐng)確保使用低流量以防止由于較高的溶劑粘度而導(dǎo)致較高的背壓。

   對(duì)于疏水性很強(qiáng)的材料,請(qǐng)嘗試使用THF 。

正常階段:

   用10倍柱體積的氯仿,IPA和/或二氯甲烷進(jìn)行沖洗。

   然后用流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)節(jié)。

Tips:

   清潔時(shí),將流速設(shè)置為低于方法流速 。

   特別是在嘗試使用甲醇或IPA進(jìn)行清潔時(shí)。

   較長時(shí)間的清潔比增加更多的循環(huán)更有利。

   建議不要使用非常大量的THF,特別是如果系統(tǒng)有塑料管。如果管道是金屬,則用THF清洗是可以的。

   嘗試反向沖洗色譜柱;逆著列標(biāo)簽上箭頭的方向緩慢流動(dòng)。

柱再生

反相•   進(jìn)行與上述清潔相同的梯度沖洗,并在低流量下通宵過夜。

正相•   為了除水,請(qǐng)沖洗:

1.30毫升己烷中的2.5%2,2 二甲氧基丙烷和2.5%冰醋酸。

2.然后從上方用清洗方法沖洗色譜柱,以低流速過夜 。

柱存儲(chǔ) 

在保存之前,請(qǐng)確保您的色譜柱是干凈的,這一點(diǎn)非常重要。這包括去除緩沖液,鹽,樣品和離子對(duì)試劑。

推薦的存儲(chǔ)條件是:

   反相:乙腈/ H 2 O(65:35 v / v),可用甲醇代替乙腈。

   正相:100%己烷或IPA

   離子交換:100%甲醇

•   HILIC:乙腈/ H 2 O(80:20 v / v)

延長色譜柱壽命的技巧

   利用樣品制備技術(shù),例如固相提取(地層® -X SPE產(chǎn)品)或配件(PHENEX ™注射式過濾器) ,以不希望的污染物的噴射最大限度地減少到您的系統(tǒng)和柱。

   使用正確的保護(hù)柱或保護(hù)柱系統(tǒng)(SecurityGuard ™)幫助清除顆粒,以免污染 色譜柱。

   不要使色譜柱超載。注入合適的樣品濃度和體積。見圖表:典型 加載 容量

   在色譜柱的合適分離模式下工作 。有關(guān)每個(gè)固定相使用的典型模式,請(qǐng)參見列特性圖。

   將色譜柱存放在適當(dāng)?shù)娜軇┲小?/span>

   溶劑通過從一個(gè)混溶相緩慢馴化正確地切換 溶劑 到 所述 其他 在 一個(gè) 低 流量: 0.1 毫升/分鐘 為 2.1 毫米 ID 和內(nèi)徑4.6 mm時(shí)為0.5 mL / min。

保修

Phenomenex HPLC色譜柱保證達(dá)到規(guī)定的性能和質(zhì)量,并且不存在材料和工藝上的缺陷。如果您不滿意的任何理由,請(qǐng)致電PHENOMENEX售后技術(shù)部。我們將竭盡所能解決問題,使您滿意。如果有必要退回該列,則必須先從Phenomenex獲得退回授權(quán)號(hào)。

免責(zé)聲明

新色譜柱應(yīng)使用制造商推薦的測試混合物進(jìn)行測試,而先前使用的色譜柱應(yīng)使用相同或合適的測試混合物進(jìn)行分析。記得重新平衡系統(tǒng)使用高純度的溶劑。切勿從一種溶劑變?yōu)椴换烊艿牧硪环N溶劑,而不要經(jīng)過可與兩種溶劑混溶的中間溶劑。這會(huì)損壞色譜柱。切勿將緩沖液/鹽不溶于第二種溶劑的溶液更改為緩沖液/鹽的溶液。同樣,這會(huì)損壞色譜柱。切勿嘗試卸色譜柱,這將使保修無效。

柱震蕩

小心處理色譜柱。請(qǐng)勿跌落或造成物理震動(dòng)。不要以高流量啟動(dòng)泵,而要在幾分鐘后逐漸增加流量。設(shè)置泵壓力極限,以在發(fā)生堵塞時(shí)保護(hù)色譜柱。這會(huì)產(chǎn)生空隙,將對(duì)色譜柱的性能產(chǎn)生不利影響。

感謝您的閱讀。若有色譜柱疑問請(qǐng)咨詢飛諾美代理商:廈門廣晟達(dá)儀器設(shè)備有限公司

 

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