液相色譜柱即使樣品和流動(dòng)相已做過(guò)前處理，也仍難以完成避免柱子受到污染，因此必須對(duì)柱子行清洗。清洗應(yīng)定期進(jìn)行，如果在短期內(nèi)分析許多樣品，則以每日清洗一次為宜，至少也應(yīng)一周一次，防止有太多的雜質(zhì)在柱上堆積。
反相柱的常規(guī)洗滌辦法是：分別取甲醇、甲醇-水各20倍柱體積（既對(duì)于一根4.6mmX25cm的柱來(lái)說(shuō)，通常是50-60ml，而對(duì)于9.4mm內(nèi)經(jīng)X50cm的柱來(lái)說(shuō)，通常是500-600ml） ，使之通過(guò)柱子。然后用流動(dòng)相平衡（通常仍用20倍柱體積），柱一般將恢復(fù)正常。如果選擇性仍和以前不一樣，則表明還有其他雜質(zhì)留在柱子里，這時(shí)應(yīng)考慮更加嚴(yán)格的清洗：先用20倍柱體積的水，再用相同體積0.05mol/L硫酸，后用流動(dòng)相溶劑。酸洗常能洗下有機(jī)溶劑所不能洗下的剩余雜質(zhì)。在低pH值下做長(zhǎng)期（一天或更長(zhǎng)）清洗是不適宜的，但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min，一般對(duì)健合相沒(méi)有損害。注意，強(qiáng)堿不能用來(lái)清洗任何微粒硅膠柱（不論是健合相還是非健合相），因?yàn)楣枘z骨架會(huì)溶解。對(duì)于嚴(yán)重污染的反相柱，只能采用再生的方法。
液相色譜柱的清洗：
1、沖洗系統(tǒng)細(xì)節(jié)多，尤其注意緩沖鹽在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，我們需要沖洗并穩(wěn)定系統(tǒng)，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后，我們也需要使用適當(dāng)?shù)娜軇_洗并保護(hù)系統(tǒng)。
2、置換系統(tǒng)流動(dòng)相需要沖洗多長(zhǎng)時(shí)間其實(shí)我們很難用時(shí)間準(zhǔn)確的說(shuō)明這個(gè)問(wèn)題，因?yàn)闆_洗時(shí)間會(huì)受流速和柱體積的影響。
所以這里建議大家用沖洗體積來(lái)計(jì)算，由于液相系統(tǒng)中的管線和色譜柱都比較細(xì)，流速相對(duì)比較慢，所以流動(dòng)相置換的過(guò)程是比較慢的，需要5~10倍以上的系統(tǒng)體積才能*置換原有的流動(dòng)相（并非專業(yè)術(shù)語(yǔ)，僅做問(wèn)題舉例），所以只用知道系統(tǒng)體積即可。
系統(tǒng)體積包含儀器管線體積和色譜柱體積，比如管線體積是1ml，色譜柱的空余體積是3ml，系統(tǒng)體積就是4ml，用至少5倍的流動(dòng)相沖洗，也就是需要20ml，10倍體積相當(dāng)于40ml。有了沖洗體積，結(jié)合流速，自然就能計(jì)算出到底需要多長(zhǎng)時(shí)間才能把體系置換好，沖洗干凈，比如，流速1ml/min時(shí)，大概需要20~40分鐘才能*置換系統(tǒng)中原有的流動(dòng)相。
3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后用什么溶劑保護(hù)體系溶劑的選擇取決于色譜柱的類型，比如反相體系，色譜柱的體系基本為C8、C18類的，甲醇和乙腈是比較合適的溶劑，只是注意乙腈不能長(zhǎng)期保存在液相系統(tǒng)中，因?yàn)橐译嬗芯酆系膯?wèn)題；
若是正相體系，比如氨基柱、氰基柱等正相色譜柱，正己烷是比較合適的溶劑，如果是離子交換柱，用水沖洗體系即可。
4、如何沖洗緩沖鹽需要格外注意的是，緩沖鹽在有機(jī)相中是不溶解的，所以千萬(wàn)不能用有機(jī)相直接沖洗緩沖鹽體系，否則鹽顆粒析出會(huì)堵塞管線和色譜柱，一定要有過(guò)渡。
這里建議分三個(gè)階段沖洗緩沖鹽體系：（1）用大比例水，小比例有機(jī)相沖洗一段時(shí)間，這樣可以保證順利的沖走大部分鹽；（2）加大有機(jī)相的比例再?zèng)_洗一段時(shí)間；（3）根據(jù)沖洗體積的計(jì)算，確保緩沖鹽已經(jīng)*被置換了之后再改為100%的有機(jī)相沖洗一段時(shí)間。
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